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INVESTIGACIÓN
sectores
Introducción
Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC), importante patógeno emergente asociado a enfermedades transmitidas por alimentos (ETA), puede causar enfermedades severas
en el hombre, como colitis hemorrágica (CH), Síndrome Urémico Hemolítico (SUH) y Púrpura Trombocitopénica Trombótica (PPT). Las cepas de esta categoría de E. coli producen potentes citotoxinas, llamadas toxinas Shiga
(Stx1, Stx2 y variantes de Stx2). La infección por STEC fue reconocida por primera vez, por Riley y col. en 1982 en EE.UU. cuya cepa correspondió al serotipo O157:H7. Desde entonces, este serotipo ha sido asociado a numerosos brotes en distintas partes del mundo. Algunos de estos brotes se han relacionado con el consumo de alimentos: carnes, leche no pasteurizada, yogures artesanales, sandwiches de pollo, jugo de manzana no pasteurizado, agua de consumo y recreacional, entre otros.
La transmisión persona a persona, por la ruta fecal-oral, es también muy importante especialmente en comunidades cerradas como guarderías, hogares de ancianos y escuelas. Menos de 10 UFC de E. coli O157:H7 pueden ser su cientes para causar la enfermedad en humanos. Dosis infectivas bajas, de 2 a 2,000 microorganismos, han sido asociadas
con brotes. Las cepas STEC causantes de infecciones en
seres humanos, pertenecen a un amplísimo número de serotipos, habiéndose detectado la producción de Stx en cepas pertenecientes a más de 50. A nivel mundial se han descripto brotes asociados a los serotipos O111:H-; O117:H4; O121:H19; O145:H-; O26:H11, entre otros.
Propósito
Contribuir con la prevención y control de la diarrea mucosanguinolenta y SUH, con el  n de disminuir su morbi-mortalidad, a través de la identi cación de alimentos potencialmente causantes de infección.
Objetivo General
Conocer la frecuencia de detección de STEC en hamburguesas y quesos de pasta blanda.
Objetivos Especí cos
1. Establecer la frecuencia de aislamiento de E. coli O157:H7 y otros STEC en hamburguesas y quesos de
pasta blanda, alimentos implicados como fuente de
infección.
2. Caracterizar feno-genotípicamente las cepas STEC
aisladas.
3. Realizar estudios de sensibilidad antimicrobiana de
dichos patógenos.
Materiales y métodos
Se recibieron aislamientos de E. coli provenientes de 95 muestras de hamburguesas congeladas y 114 muestras de quesos de pasta blanda. El protocolo de primo-aislamiento e identi cación se realizó según Blanco J.E. y col. La caracterización genotípica de los factores de virulencia se realizó por:
*PCR utilizando como “primers” los oligonucleotidos especí cos que ampli can fragmentos de los genes de stx1, stx2 (según Pollard y col. J Clin Microbiol 1990;28:540-5) y Enterohemolisina(E-hly) (según Schmidt y col. Infec Immun 1995; 63:1055-61)
*Pruebas de hibridación con sondas genéticas marcadas
con digoxigenina en condiciones de alta astringencia, para
la detección de los genes que codi can el factor eae (según Nataro y col. J Infect Dis 1985; 152:560-5) y stx1, stx2 (según Thomas y col. Mol cel Probes 1991; 5:129-35)
*PCR y RFLP (análisis de los tamaños de los fragmentos de restricción) para la caracterización de variantes de stx2 (según Tyler y col. J Clin Microbiol 1991;29:1339-43)
El seroagrupamiento de las cepas se realizó con los antisueros somáticos O26, O55, O111, O119, O142, O157 y el  agelar H7, provistos por el Instituto de Producción de Biológicos, ANLIS “Dr. Carlos G. Malbrán”. Se completó la serotipi cación con antisueros O y H (Denka Seiken Co., Ltd. Japón) (según rskov y col. Methods in Microbiol 1984; 14: 43-112 ). Estos resultados fueron con rmados por la Dra. Beatriz Guth de la Disciplina Microbiología, EPM, UNIFESP. Sau Paulo, Brasil.
Se realizaron ensayos de citotoxicidad especí ca en células Vero de sobrenadantes y extractos celulares periplásmicos, utilizando anticuerpos monoclonales Stx1 (MAb13C4) y Stx2 (MAb BC5BB12) (según Karmali y col. J Clin Microbiol 1985; 22: 614-9). El per l de sensibilidad a ampicilina, neomicina,
Detección de Escherichia coli productor de
toxina Shiga (STEC) en alimentos
Gómez, Diana (1); Miliwebsky, Elizabeth (3); Fernández Pascua, Carlos (1); Ameztoy Ana María (1); Baschkier, Ariela (3); Manfredi, Eduardo (3); Zotta, Marcelo (1), Córdoba, Marcelo (1); Nario, Flavia (2); Piquín, Andrea (2); Rivas, Marta (3); Parma, Alberto (4). (1) Instituto Nacional de Epidemiología “Dr.J.H.Jara” - ANLIS “Dr.C.G.Malbrán”; (2) Laboratorio de Control de Calidad, Supermercados Toledo (3) Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas - ANLIS “Dr.C.G.Malbrán”; (4) Universidad del Centro de la Provincia de Buenos Aires, Facultad de Ciencias Veterinarias;


































































































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